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Roshe Run Shop espressione uninduced di una luciferasi medie

Roshe Run Shop

La prima generazione di vettori di espressione inducibili per Trypanosoma brucei utilizzato un unico promotore tetraciclina-sensibile per guidare l'espressione di un gene sperimentale, in tandem con un gene marcatore di resistenza ai farmaci per selezionare per l'integrazione (Wirtz E, Science 1995 Clayton CE; 268: 1179. -1183). Poiché la resistenza ai farmaci e di espressione genica sperimentale sia dipendevano l'attività del promotore regolato, questo approccio non poteva essere utilizzato per l'espressione inducibile di prodotti tossici. Abbiamo ora sviluppato un duplice approccio promotore, per esprimere prodotti altamente tossici e generando condizionali Roshe Run Shop gene knock-out, utilizzando back-to-back T7 costitutiva e promotori PARP tetraciclina-sensibile per guidare l'espressione del marcatore selezionabile e test genetico, rispettivamente. Trasformanti sono facilmente ottenuti con questi vettori in assenza di tetraciclina, in linee di sangue o prociclico T. brucei cellule co-esprimono Nike Roshe Run Milano T7 RNA polimerasi e repressore Tet, e dimostrano costantemente espressione tetraciclina-sensibile attraverso una serie 103-104 volte. Sfondo espressione uninduced di una luciferasi medie giornalista non più di una molecola per cella, consentendo approcci dominanti negativi basandosi su espressione inducibile di prodotti tossici. Questa stretta regolazione permette anche la produzione di gene funzionale knock-out attraverso l'espressione di un gene regolato sperimentale in uno sfondo null mutante.
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